在细胞培养的领域，我们通常将细胞分为两大类：贴壁细胞和悬浮细胞。贴壁细胞需要附着在培养皿上才能生长，而悬浮细胞则可在液体培养基中自如漂浮、增殖。通常我们会认为贴壁细胞更需要考虑培养皿表面的适应性，以及是否需要使用胶原蛋白或多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）等物质来增强附着力。然而，如果你以为悬浮细胞就完全不需要包被，那就可能被它们轻盈的外表所误导。实际上，在某些关键实验操作中，悬浮细胞同样可能需要短暂“靠岸”，并依赖于包被表面的支持。今天我们将讨论的是：悬浮细胞为什么有时需要包被？以及如何进行包被，效果又如何？

1. 悬浮细胞并非永远不附着

在细胞培养的环境中，我们常常把细胞分为两种：贴壁细胞和悬浮细胞。贴壁细胞需要依附于培养皿才能生存，而悬浮细胞则能在液体培养基中自由移动并繁殖。尽管贴壁细胞需要关注养殖环境的适宜性，悬浮细胞也并非完全不需要包被。在某些实验条件下，悬浮细胞可能需要暂时稳固地附着在培养表面，这就是我们今天讨论的核心。

2. 什么是多聚赖氨酸（PLL）包被？

多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）是一种合成的阳离子多肽，含有丰富的氨基基团，并带有强正电荷。由于细胞膜表面通常是负电荷，PLL能够通过静电相互作用将细胞“吸附”在表面上。这种包被方式广泛应用于初代神经元、干细胞等多种难以贴壁的细胞培养以及组织切片或细胞爬片染色的固定，增强某些表面抗体或细胞的粘附力。在贴壁细胞中，PLL的包被能提升细胞的附着速度与均匀性，而在悬浮细胞中，则主要用于促进短期固定以配合功能性实验。

3. 悬浮细胞需要包被的常见情境

在以下几种情况下，悬浮细胞的包被是非常有必要的：
1. **免疫荧光成像与免疫染色**：悬浮细胞在普通培养皿中操作时容易在洗涤过程中丢失，使用PLL包被的玻片或培养皿可暂时固定细胞，提高成像信号的稳定性与信噪比。
2. **电转染后细胞收集**：电转后的悬浮细胞在恢复期相对脆弱。直接离心收集会导致大量细胞丧失，而将其短暂培养在PLL包被的培养板中，有助于提高转染效率和活性细胞比例。
3. **细胞富集及原位功能检测**：如ELISPOT及细胞毒性检测等实验需在细胞原位观察反应。此类实验对细胞分布稳定性有较高要求，包被可帮助固定悬浮细胞。
4. **低密度培养中的聚团问题**：在低密度培养中，悬浮细胞可能因流动过快而难以扩增，适当包被可以形成“锚点”，减少细胞间干扰。
5. **外泌体/病毒收集实验中的定点处理**：在外泌体研究中，有时为保持细胞分泌稳定，需要在轻度PLL包被条件下固定悬浮细胞，以避免漂浮密度差异对实验结果的影响。

4. 如何正确使用PLL包被？

在使用PLL进行包被时，有几点需要特别注意：包被并不是为了让悬浮细胞像贴壁细胞那样长期生长。一般情况下，包被主要为了短期固定、提高操作效率和成像质量，且可能不会长时间附着。此外，盲目延长包被的时间可能会改变细胞状态及其生物学特性，因此应根据实验目标合理设定处理时间和强度。

5. 何时不应使用包被？

并非所有悬浮细胞实验都必须进行包被。在某些情况下，应该避免使用包被，比如：
🚫 长期培养的悬浮细胞，如293F在生物反应器中的培养，不宜加包被，需使用低附着力培养皿（如聚HEMA处理）。
🚫 需要完全不附着状态的实验，如免疫学中的某些流式功能检测、抗体介导的细胞毒性测试，包被可能会影响结果的真实性。

6. 结论

悬浮细胞在特定情况下也需要“靠岸”。无论是为了成像、收集、固定还是维持操作的稳定性，适当的表面包被（如PLL）在关键环节中能够显著提升实验的成功率和数据质量。请记住，悬浮不等于永远漂浮，科学实验重在适时适地，包被就是成功实验中的一个重要技巧。探索生物医疗的奥妙，尽在俄罗斯专享会294，让科学与实践更紧密结合。