产品及特点
本产品是基于探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具有以下特点：
1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板；
2. 引物等组分经过优化，具备高灵敏度；
3. 提供阳性对照，以便于区分假阴性样品；
4. 高特异性，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA的交叉反应；
5. 可用于定性和定量检测，定量时线性范围至少达到5个数量级；
6. 本产品足够进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应；
7. 本产品仅限于科研使用。

方法：
一、DNA提取（样本制备区）
使用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品（样本制备区）
（因阳性对照浓度较高，以下稀释操作应在独立区域内进行，以避免污染样品或本试剂盒的其他成分。）
1. 标记6个离心管，标记为7，6，5，4，3，2；
2. 使用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H2O；
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照（试剂盒提供），充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用；
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用；
5. 更换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用；
6. 重复上述操作，直至获得6个稀释度的标准曲线样品，置于冰上待用。若不制作标准曲线，则将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）
若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中分别加入相关成分（详见说明书，可向我司索取），并转移至样本准备区。

四、添加模板（模板添加区）
向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）
将PCR管放置于PCR扩增仪器的相应样品槽中进行扩增，扩增程序详见说明书（可向我司索取）。

六、结果分析
1. 若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线，进而推算待测样品DNA的浓度log值；
2. 若未制作标准曲线，按照如下标准判定结果：阳性对照结果：Ct值<30，出现明显指数增长，呈典型S型曲线；阴性对照结果：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期；样本检测结果：Ct值<35，出现明显指数增长，表明样本中检出婴儿利什曼虫，因此结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表明样本中未检出婴儿利什曼虫，因此结果为阴性；Ct值在35-38范围，应对样本进行复检，如重复实验结果说明Ct值仍在35-38范围，且出现明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存：
低温运输，保存于-20℃，保存期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。

特别强调，使用俄罗斯专享会294的一系列生物医疗产品可确保您的实验结果精准可靠，助力科研的深入发展。