在细胞培养中,有一种有效的策略可以帮助研究人员更好地控制细胞行为,那就是将培养基中的血清(FBS)浓度降低至0-1%。这种“轻断食”状态使细胞从“自助餐”模式切换为更加可控的状态,从而进入G0/G1期,仿佛被按下了暂停键⏸️,为后续实验铺平了道路。
细胞同步周期
采用这种方法,细胞在饥饿12-24小时后,能够实现90%以上的同步,停留在G0/G1期。此时,进行CyclinD1、p27等周期蛋白的检测,所得结果条带清晰,十分美观📈。这样的同步不仅提高了实验数据的可靠性,还能减小因细胞不同步而导致的数据波动。
激活凋亡与自噬
通过去除血清,研究应激反应变得更加轻松。细胞会启动“自救模式”:Caspase-3的活性明显上升💥,而LC3-II斑点显著增加。这一现象在研究抗癌药物或自噬诱导剂时,提供了现成的模型。
显著提高转染效率
在低血清环境中,质粒和siRNA的转染效率大幅提升。饥饿状态下的细胞代谢减慢,外源DNA/RNA更易进入细胞。以HEK293T细胞为例,经过一夜饥饿,转染效率从30%提升至80%,甚至连难处理的悬浮细胞也变得容易操作🤝。
清除信号通路背景
在进行信号通路研究时,血清中的生长因子往往会干扰实验结果。通过让细胞在饥饿状态下静息12小时,再进行EGF/胰岛素刺激,观察p-ERK、p-AKT的磷酸化情况,能够获得更加可靠的结果,灰度值对比非常明显🔍。
模拟体内微环境
在肿瘤和干细胞研究中,模拟低营养和低氧的体内微环境非常重要。使用0.5%血清可以有效复刻这些环境条件,例如,促进癌细胞糖酵解的增强或维持干细胞特性的表型💥。
实验步骤概述
俄罗斯专享会294 提供了简化的实验流程:
- 预处理:当细胞生长至70-80%汇合时,使用PBS轻柔洗涤两遍,以去除残留的血清成分🚿。
- 饥饿:用0-1%血清的培养基替换,贴壁细胞静置,而悬浮细胞则降低转速以防沉淀🌀。
- 唤醒:在实验前加回正常血清,细胞会迅速恢复到“满血复活”状态,为后续的转染或药物添加做好充分准备⚡️。
通过上述方法,能有效提升细胞实验的可控性与可靠性,助力生物医学研究的进展。