产品及特点
本产品是依据探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具有以下特点：

使用方便

1. 本试剂盒即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 经过优化的引物等组件，具备高灵敏度。
3. 提供阳性对照，以便于区分假阴性样品。

高特异性

4. 引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，确保与其他生物样本的DNA没有交叉反应。
5. 本试剂盒可用于定性和定量检测，定量检测时线性范围可达至少五个数量级。

充足的试剂量

6. 产品足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本试剂盒仅限于科研用途。

操作步骤

一、DNA提取（样本制备区）

采用自选方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

（由于阳性对照浓度较高，稀释操作应在独立区域内进行，以避免污染样品或试剂盒成分）。
1. 标记六个离心管，分别编号为7、6、5、4、3、2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O（建议使用带芯枪头）。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/μL），充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。

4. 更换枪头，在6号管中加入5μL的阳性对照（来自上一步的稀释液），震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。
5. 重复以上步骤，直到得到六个稀释度的标准曲线样品。若不需制作标准曲线，则将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

准备N+2个qPCR管（其中N为待检样品数，另加1个阴性对照和6个阳性对照），向各PCR管中添加相应成分（详细说明可索取）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中加入2μL模板，加入顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器的相应位置，进行扩增，扩增程序请参阅详细说明（可索取）。

六、结果分析

1. 如果制作了标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线。根据待测样品的Ct值推算其DNA浓度的log值；
2. 如果未制作标准曲线，则根据以下标准判定结果：
阳性对照结果：Ct值<30且呈现显著的指数增长，展示典型的S型曲线；
阴性对照结果：Ct值达到38或无Ct值，无明显增长期。
检测样本结果：Ct值<35表示阳性，Ct值38或无Ct值表示阴性；若Ct值在35-38之间，需复检，重复实验如仍在此范围并显著增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

本产品应低温运输，保存于-20℃，保质期为一年。阳性对照需单独存放，避免与其他试剂交叉污染。

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